নটীর পূজা অবদানশতকের একটি কাহিনী অবলম্বনে রচিত। এই কাহিনীটি অবলম্বনে কথা ও কাহিনীর অন্তর্গত পূজারিনী কবিতাটিও রচিত হইয়াছিল।
১৩৩৩ সালের ২৫ বৈশাখ সায়ংকালে রবীন্দ্রনাথের জন্মোৎসব উপলক্ষ্যে নটীর পূজা প্রথম অভিনীত হয়—অভিনয়স্থল উত্তরায়ণ, কোণার্ক, শান্তিনিকেতন। শান্তিনিকেতনের নিম্নোল্লিখিত ছাত্রীগণ বিভিন্ন ভূমিকায় অবতীর্ণ হইয়াছিলেন:
লোকেশ্বরী॥ শ্রীমালতী সেন
মল্লিকা॥ শ্রীঅমিতা সেন
রাজকুমারীগণ॥ শ্রীমমতা সেন, রমা মজুমদার, শ্রীলতিকা রায়, শ্রীচিত্রা ঠাকুর, শ্রীজ্যোৎস্না চট্টোপাধ্যায়
উৎপলপর্ণা॥ শ্রীইভা বসু
শ্রীমতী॥ শ্রীগৌরী বসু
মালতী॥ শ্রীঅমিতা চক্রবর্তী
রাজকিংকরীগণ॥ অমিতা সেন বা খুকু, ও অন্যান্য
রক্ষিণীগণ॥ শ্রীসুমিতা চক্রবর্তী ও অন্যান্য
প্রথম অভিনয়ে উপালি চরিত্র ছিল না, উপালি চরিত্র সংবলিত সূচনা অংশও গ্রন্থের প্রথম মুদ্রণের সময় ছিল না। ১৩৩৩ সালের ১৪ মাঘ কলিকাতার জোড়াসাঁকো ঠাকুরবাড়িতে দ্বিতীয় অভিনয়ের সময় ঐ অংশ যোজিত হয়, উপালির ভূমিকায় রবীন্দ্রনাথ অভিনয় করিয়াছিলেন। নটীর পূজার সূচনা অংশ দ্বিতীয় সংস্করণে মুদ্রিত হয়।